ਡਿਥੀਓਥਰੀਟੋਲ (ਡੀਟੀਟੀ) ਇੱਕ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲਾ ਏਜੰਟ ਹੈ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਨਵਾਂ ਗ੍ਰੀਨ ਐਡਿਟਿਵ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਦੋ ਮਰਕੈਪਟਨ ਸਮੂਹਾਂ (-SH) ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਛੋਟਾ ਅਣੂ ਜੈਵਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੈ।ਇਸ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਡੀਟੀਟੀ ਨੂੰ ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ ਅਤੇ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਬਾਇਓਮੋਲੀਕਿਊਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ ਹੈ।ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਫੋਲਡਿੰਗ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਦਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਿੱਸਾ ਹੈ, ਪਰ ਕੁਝ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਘੱਟ ਕਰਨ ਯੋਗ SDS-PAGE ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮੁੜ ਸੰਯੋਜਨ ਅਤੇ ਫੋਲਡਿੰਗ, ਦੇ ਸਥਾਨਿਕ ਢਾਂਚੇ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਣ ਲਈ ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਦੋ ਥਿਓਲ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਘਟਾਉਣਾ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ.ਡੀਟੀਟੀ ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡਾਂ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਮਰਕਾਪਟਨ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਸਥਾਨਿਕ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਕਰਨਾ ਆਸਾਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਲਈ ਵੀ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਕੁਝ ਐਨਜ਼ਾਈਮ-ਉਤਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ, ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਆਕਸੀਡੈਂਟ ਦੁਆਰਾ ਘਟਾਈ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਡੀਟੀਟੀ ਆਕਸੀਡੈਂਟਸ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨਦੇਹ ਪਦਾਰਥਾਂ ਤੱਕ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਰਵਾਇਤੀ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟ ਜਿਵੇਂ ਕਿ β-mercaptoethanol (β-ME) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, DTT ਨੂੰ ਇੱਕ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਅਤੇ ਵਧੇਰੇ ਸਥਿਰ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲਾ ਏਜੰਟ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਨਾ ਸਿਰਫ ਜਲਮਈ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਐਸਿਡ-ਬੇਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਵੀ ਇਸਦੇ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।
ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਸਧਾਰਨ ਹੈ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਡੀਟੀਟੀ ਨੂੰ ਇੱਕ ਉਚਿਤ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਡੀਟੀਟੀ ਦੀ ਸਰਵੋਤਮ ਤਵੱਜੋ ਨੂੰ ਖਾਸ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੈ, ਅਤੇ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 0.1-1 ਐਮਐਮ ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਸੈੱਲ ਦੇ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵੱਧ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵਧੇਰੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੈੱਲ ਪਾਚਕ ਬੋਝ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ IPTG ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਟੈਸਟ ਕਰਵਾ ਕੇ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਛੋਟੇ ਪੈਮਾਨੇ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਟੈਸਟਾਂ ਨੂੰ IPTG ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ਆਦਿ) ਦੀ ਇੱਕ ਰੇਂਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਜਿਵੇਂ ਪੱਛਮੀ) ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਧੱਬਾ ਜਾਂ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਖੋਜ)।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਾਲੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਜੋਂ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਤੁਸੀਂ ਸਮਾਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਤਹਿਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ IPTG ਇਕਾਗਰਤਾ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸਾਹਿਤ ਜਾਂ ਹੋਰ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਦੇ ਅਨੁਭਵ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਵੀ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਸਕਦੇ ਹੋ।
ਇਹ ਨੋਟ ਕਰਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿ ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ, ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਕੇਸ-ਦਰ-ਕੇਸ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।
ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਡੀਟੀਟੀ ਇੱਕ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲਾ ਏਜੰਟ ਹੈ ਜਿਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਬਾਇਓਮੋਲੀਕਿਊਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡਾਈਸਲਫਾਈਡ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਅਤੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਸਥਿਰਤਾ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਬਾਇਓਕੈਮਿਸਟਰੀ ਅਤੇ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿਗਿਆਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਸਤੰਬਰ-28-2023