ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ ਹੈ?
ਇੰਡਿਊਸਰ IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside) ਲਈ, ਇਕਾਗਰਤਾ ਜਿੰਨੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੋਵੇਗੀ, ਉੱਨਾ ਹੀ ਬਿਹਤਰ ਹੈ।ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਖਾਸ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਲੋੜੀਂਦੇ ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, IPTG ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1-1 mM ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਘੱਟ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਸੈੱਲ ਦੇ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਵੱਧ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵਧੇਰੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੈੱਲ ਪਾਚਕ ਬੋਝ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ IPTG ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਟੈਸਟ ਕਰਵਾ ਕੇ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਛੋਟੇ ਪੈਮਾਨੇ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਟੈਸਟਾਂ ਨੂੰ IPTG ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ਆਦਿ) ਦੀ ਇੱਕ ਰੇਂਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਜਿਵੇਂ ਪੱਛਮੀ) ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਕੇ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਧੱਬਾ ਜਾਂ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਖੋਜ)।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਾਲੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਜੋਂ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਤੁਸੀਂ ਸਮਾਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਤਹਿਤ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ IPTG ਇਕਾਗਰਤਾ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸਾਹਿਤ ਜਾਂ ਹੋਰ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਦੇ ਅਨੁਭਵ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਵੀ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹੋ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਲੋੜਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਸਕਦੇ ਹੋ।
ਇਹ ਨੋਟ ਕਰਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿ ਸਰਵੋਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ, ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਕੇਸ-ਦਰ-ਕੇਸ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਸਤੰਬਰ-28-2023